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產品及特點

本酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品，它具有下列特點：

1.         一次制備，-80℃保存，多次使用，免去每次轉化都要制備釀酒酵母感受態細胞。

2.         操作簡單，單溶液制備，除酵母培養的時間外，整個操作只需要30分鐘

3.         主要用于釀酒酵母S. cerevisiae，也適用于其他多種實驗用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。

4.         受體酵母可以不含質粒，也可用于攜帶有選擇性質粒的酵母（如雙雜交體系中的酵母）。

5.         對釀酒酵母，最高轉化效率可達到0.2-1×10⁵個轉化子/ug質粒DNA。對其他酵母，效率稍低，范圍在100-2000個轉化子/ug質粒DNA。

6.         得到的感受態細胞可以用各種線性或環狀酵母穿梭質粒DNA進行轉化，例如YIp, YRp, YCp, YEp和YAC等。

7.         可以用于酵母雙雜交、定點突變（Site－Directed Mutagenesis）、基因破壞（Gene Disruption）、等位突變基因修復（Mutant Allele Recovery）等實驗。

8.         本產品可以制備20只酵母感受態細胞（需要200mL酵母培養液），其中A型只用于制備感受態細胞，B型還帶高效轉化液。

規格及成分

自備試劑

YPD培養基

運輸及保存

常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法

一：酵母化學感受態細胞的制備

說明：按本方法制備1管酵母化學感受態細胞就需要OD600達到0.6-1.0的新鮮酵母培養液10 mL，用戶需根據所需酵母感受態細胞的數量決定培養細胞的體積。如果超過10 mL，則制備液的使用量需要按比例增加。

1、  挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過3周的也可以），接種到裝在50mL 離心管中的10 mL的自備的YPD培養基中。

2、  30℃搖晃培養，搖床速度250 rpm/分鐘，直到OD600達到0.6-1.0（相當于0.6-1×10⁷細胞/mL）。

3、  室溫3000rpm離心5 min，棄上清得酵母細胞沉淀。

4、  新鮮制備適量的酵母感受態制備工作液。對10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：將4.75 mL制備液A、0.25 mL制備液B和0.25 mL制備液C加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。酵母感受態制備工作液可放室溫待用。

5、  用0.5倍體積的新鮮配制的酵母感受態制備工作液洗滌酵母細胞沉淀一次（對10 mL酵母則需要5 mL酵母感受態制備工作液）。即混合后振蕩1分鐘，室溫3000rpm離心3分鐘，去上清得洗滌后的酵母細胞沉淀。

6、  再用0.02倍體積的酵母感受態制備工作液充分重懸菌體（對10 mL酵母，則需要0.2 mL酵母感受態制備工作液）。

7、  按每管0.2 mL分裝到冷凍管中，放入保溫冰盒中冷卻半小時后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL的感受態細胞足夠1次轉化使用。注意：放入保溫冰盒的目的是使溫度緩慢下降，急凍將使轉化效率降低，這點跟大腸桿菌感受態制備過程不同。

二：化學轉化酵母感受態細胞（只有B型提供相關試劑）

1.     將總體積不超過20 uL的0.1-5 ug質粒DNA加到剛從-80℃冰箱取出的、還處于凝固狀態的0.2 mL酵母感受態細胞上。注意：最好同時做一個不加質粒DNA的陰性對照組。

2.     室溫充分振蕩直到凝固的感受態細胞完全融化。注意：此步非常關鍵，如果能在恒溫振蕩器上37℃振蕩5分鐘，則效果更好。

3.     加入1.4mL轉化液A，輕柔顛倒混勻一分鐘。

4.     30℃培養1小時。

5.     室溫3000g離心5秒，棄上清。

6.     在酵母細胞沉淀中加1.0 mL 轉化液B，振蕩一分鐘。

7.     室溫3000g離心5秒，棄上清。

8.     在酵母沉淀細胞中加入適量（如100 uL）的轉化液B，混勻后在在選擇培養基上全部涂盤。

9.     30℃培養3-5天后即得酵母轉化菌落。

相關產品

酵母電轉感受態細胞制備試劑盒，裂殖酵母感受態細胞制備試劑盒。